Abstract Bovine trypanosomosis, caused by Trypanosoma vivax, is a disease that originated in Africa and currently affects cattle in several South American countries, including almost all Brazilian states. Despite the reports on T. vivax infection in southern Brazil, data on its circulation status is currently unavailable. In this study, we aimed to detect anti-Trypanosoma spp. IgG antibodies in cattle from Rio Grande do Sul and suggest areas with T. vivax transmission risk. A total of 691 serum samples from cattle in the intermediate regions of Rio Grande do Sul were analyzed using indirect immunofluorescence assay (IFA). The overall seroprevalence of anti-Trypanosoma antibodies in cattle was 24.6% (170/691). The detection rate ranged from 0-37.3%, with a high prevalence in the intermediate regions of Ijuí (37.3%), Uruguaiana (30.7%), and Passo Fundo (28.9%). Thus, these regions were suggested as possible bovine trypanosomosis risk areas due to the high seroprevalence. This is the first serological study to determine Trypanosoma spp. infection status in cattle from Rio Grande do Sul, providing data on the epidemiology of trypanosomosis in the state.

Resumo A tripanossomose bovina, causada por Trypanosoma vivax, é uma doença que teve origem na África, e atualmente, afeta bovinos em diversos países da América do Sul, incluindo quase todos os estados brasileiros. Apesar dos relatos de infecção por T. vivax, no sul do Brasil, dados sobre seu status de circulação não estão disponíveis atualmente. Neste estudo, o objetivo foi detectar anticorpos IgG anti-Trypanosoma spp. em bovinos do Rio Grande do Sul e sugerir possíveis áreas de risco de transmissão de T. vivax. Foi analisado um total de 691 amostras de soro de bovinos, das regiões intermediárias do Rio Grande do Sul, usando-se o ensaio de imunofluorescência indireta (IFA). A soroprevalência geral de anticorpos anti-Trypanosoma em bovinos foi de 24,6% (170/691). A taxa de detecção variou de 0 a 37,3%, com uma alta prevalência nas regiões intermediárias de Ijuí (37,3%), Uruguaiana (30,7%) e Passo Fundo (28,9%). Portanto, essas regiões foram sugeridas como possíveis áreas de risco para a tripanossomose bovina, devido à alta soroprevalência. Este é o primeiro estudo sorológico a determinar o status de infecção por Trypanosoma spp., em bovinos do Rio Grande do Sul, fornecendo dados sobre a epidemiologia da tripanossomose no estado.

ABSTRACT: Cattle are considered intermediate hosts of Sarcocystis, which can cause clinical signs and lower performance in the acute phase of infection. Sarcocystis spp. are usually not visible to the naked eye during the post mortem inspection. Moreover, fresh microscopic examination and transmission electron microscopy techniques are difficult to apply to large samples. Therefore, extensive studies on Sarcocystis infection in cattle using molecular and serological methods are required. Here, we investigated Sarcocystis spp. infection in cattle using fresh microscopic examination and polymerase chain reaction of myocardium samples and compared the results with the presence of antibodies against Sarcocystis spp. in corresponding serum samples detected using indirect fluorescent antibody test. Microscopic Sarcocystis were observed in 100% of the myocardial samples, and Sarcocystis DNA was present in 86% (43/50) of these samples. Antibodies against Sarcocystis spp. were detected in 96% (48/50) and 80% (40/50) of the serum samples at 1:25 and 1:200 dilutions, respectively. The three associated methods (fresh microscopic examination, PCR and serology) showed good sensitivity and detection for Sarcocystis spp. compared with fresh microscopic examination (only), and they may facilitate diagnosis in live animals on a large scale as well as monitoring of the herd status.

RESUMO: Os bovinos são considerados hospedeiros intermediários de Sarcocystis, podendo causar sinais clínicos e menor desempenho na fase aguda da infecção. Sarcocystis spp. geralmente não são visíveis a olho nu durante a inspeção post mortem. Além disso, o exame microscópico a fresco e as técnicas de microscopia eletrônica de transmissão são difíceis de aplicar a uma amostras de grande tamanho. Portanto, são necessários extensos estudos sobre a infecção por Sarcocystis em bovinos usando métodos moleculares e sorológicos. Aqui, investigamos a infecção de Sarcocystis spp. em bovinos por meio de exame microscópico a fresco e reação em cadeia da polimerase de amostras de miocárdio e comparado os resultados com a presença de anticorpos contra Sarcocystis spp. em amostras de soro correspondentes detectadas usando o teste de anticorpos fluorescentes indiretos. Sarcocistos microscópicos foram observados em 100% das amostras de miocárdio, e o DNA de Sarcocystis estava presente em 86% (43/50) dessas amostras. Anticorpos contra Sarcocystis spp. foram detectados em 96% (48/50) e 80% (40/50) das amostras de soro nas diluições 1:25 e 1:200, respectivamente. Os três métodos associados (exame microscópico a fresco, PCR e sorologia) mostraram boa sensibilidade e detecção para Sarcocystis spp. em comparação com o exame microscópico fresco (apenas) e podem facilitar o diagnóstico em animais vivos em larga escala, bem como o monitoramento do status do rebanho.

Abstract Domestic birds such as Gallus gallus, Meleagris gallopavo, Anser anser and Numida meleagris are widely distributed throughout the world and maintain contact with humans and other animal species considered reservoirs of both Visceral Leishmaniasis (VL) and American Tegumentary Leishmaniasis (ATL), including dogs and cats; wild canids, marsupials; and synanthropic animals such as rodents and chiroptera. Therefore, this study aimed to detect the presence of anti-Leishmania spp. antibodies in birds from a rural area of the municipality of Santa Maria, southern Brazil. From May to December 2022, 262 blood samples were collected from 244 chickens, 8 turkeys, 7 guinea fowl and 3 geese, distributed in 27 rural properties in 6 districts. All the sites visited presented positive birds for the presence of Leishmania spp. Thus, it is inferred that, contact with this protozoan can induce the production of antibodies, suggesting that these animals can be used as sentinels for the circulation of this agent. In addition, the blood of these animals is a preferred food source for insects of the subfamily Phlebotominae, which can be used them as bioindicators of the presence of these phlebotomes.

Resumo Aves domésticas, como Gallus gallus, Meleagris gallopavo, Anser anser e Numida meleagris, são amplamente distribuídas pelo mundo e mantêm contato com humanos e outras espécies animais consideradas reservatórios tanto da Leishmaniose Visceral (LV) quanto da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), incluindo-se cães e gatos, canídeos silvestres, marsupiais; e animais sinantrópicos, como roedores e quirópteros. Portanto, este estudo teve como objetivo detectar a presença de anticorpos anti-Leishmania spp. em aves de uma área rural do município de Santa Maria, sul do Brasil. De maio a dezembro de 2022, foram coletadas 262 amostras de sangue de 244 galinhas, 8 perus, 7 pintadas e 3 gansos, distribuídas em 27 propriedades rurais de 6 distritos. Todos os locais visitados apresentaram aves positivas para a presença de Leishmania spp. Assim, infere-se que o contato com esse protozoário pode induzir a produção de anticorpos, sugerindo que esses animais possam ser utilizados como sentinelas para a circulação desse agente. Além disso, o sangue desses animais é uma fonte de alimento preferencial para insetos da subfamília Phlebotominae, que podem ser utilizados como bioindicadores da presença desses flebotomíneos.

RESUMO: Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. são parasitas detectados em tecidos de animais domésticos e selvagens. As aves são relevantes no ciclo de vida e epidemiologia dos protozoários devido à grande variedade de espécies de aves, hábitos alimentares e migratórios. O objetivo deste estudo foi a detecção molecular de T. gondii, N. caninum e Sarcocystis spp. em diversas espécies de aves naturalmente infectadas. Portanto, amostras de tecido de cérebro e coração foram coletados de aves recebidas e necropsiadas no Laboratório Central de Diagnóstico de Patologias Aviárias (LCDPA), sendo submetidas a extração de DNA e amplificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene 18S rRNA para Sarcocystis spp., gene NC5 para N. caninum e gene repetitivo 529 pares de bases para T. gondii. N. caninum foi detectado em duas aves (02/65; 3,07%), em amostra de cérebro de Rupornis magnisrostris (número acesso: ON182081, 267pb) e em amostras de cérebro e coração de Dendrocygna bicolor (número acesso: ON211312, 267pb). DNA do genero Sarcocystis spp. foi detectado em três aves (03/65; 4,62%), sendo que no sequenciamento genético foram identificados Sarcocystis spp. (número acesso: MW463929) em cérebro de Nymphicus hollandicus e Sarcocystis speeri (número acesso: MW464125) em cérebro e coração de Amazona aestiva. A análise filogenética revelou que Sarcocystis spp. formou um clado com Sarcocystis spp. que utilizam gambá (Didelphis aurita) como hospedeiro definitivo e S. falcatula que utilizam Lóris-molucano (Trichoglossus moluccanus) como hospedeiro intermediário. S. speeri formou um clado com S. speeri que utilizou Mus musculus como hospedeiro intermediário experimental e formou um clado com Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti e Sarcocystis sp. que afetam espécies de aves. O DNA de T. gondii não foi detectado em nenhum tecido. Este é o primeiro relato de detecção de DNA de N. caninum, Sarcocystis spp. e S. speeri em amostras de tecido para essas espécies de aves estendendo a lista de hospedeiros intermediários.

ABSTRACT: Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. are parasites detected in tissues of domestic and wild animals. Birds are relevant in the life cycle and epidemiology of protozoa due to the wide variety of bird species, feeding and migratory habits. The aim of this study was the molecular detection of T. gondii, N. caninum and Sarcocystis spp. in several species of naturally infected birds. Therefore, samples of brain and heart tissue were collected from birds received and necropsied at the Central Laboratory for the Diagnosis of Avian Pathologies (LCDPA), undergoing DNA extraction and amplification by the polymerase chain reaction (PCR) of the 18S rRNA gene to Sarcocystis spp., NC5 gene for N. caninum and repetitive gene 529 base pairs for T. gondii. N. caninum was detected in two birds (02/65, 3.07%), in a brain sample of Rupornis magnisrostris (accession number: ON182081, 267pb) and in a brain and heart sample of Dendrocygna bicolor (accession number: ON211312, 267pb). DNA of the genus Sarcocystis was detected in three birds (03/65, 4.62%), and in the genetic sequencing Sarcocystis spp. (accession number: MW463929) in brain of Nymphicus hollandicus and Sarcocystis speeri (accession number: MW464125) in brain and heart of Amazona aestiva. Phylogenetic analysis revealed that Sarcocystis spp. formed a clade with Sarcocystis spp. that use skunk (Didelphis aurita) as definitive host and Sarcocystis falcatula that use Moluccan loris (Trichoglossus moluccanus) as intermediate host. S. speeri formed a clade with S. speeri that used Mus musculus as an experimental intermediate host and formed a clade with Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti and Sarcocystis sp. that affect bird species. T. gondii DNA was not detected in any tissue. This is the first report of DNA detection of N. caninum, Sarcocystis spp. and S. speeri in tissue samples for these bird species extending the list of intermediate hosts.

RESUMO: A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene β-giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p<0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.

ABSTRACT: Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (β-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p<0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.

RESUMO: A detecção molecular de espécies de Eimeria em amostras fecais pode ser útil para fins experimentais e de diagnóstico. No entanto, a quantidade de parasitas nas fezes e a parede do oocisto são um obstáculo nos protocolos de extração de DNA. Portanto, uma amostragem adequada e a ruptura efetiva dos oocistos são essenciais para melhorar a precisão da detecção de DNA por PCR. Os objetivos deste estudo foram avaliar seis protocolos para extração de DNA de Eimeria spp. em amostras de bovinos e ovinos. Foram distribuídos 20 grupos de amostras fecais de bovinos (10 grupos) e ovinos (10 grupos) em seis protocolos de extração de DNA: kit comercial, kit comercial com modificação, DNAzol, brometo de cetil-trimetil amônio (CTAB), pérolas de vidro e kit comercial para amostras fecais. As amostras fecais foram submetidas à extração de DNA e PCR. Entre os protocolos testados, CTAB foi considerado o mais adequado para extração de DNA de oocistos (90% de detecção de DNA por PCR); DNAzol e CTAB resultaram em maior detecção de DNA em amostras de bovinos (80%). CTAB e kit comercial com modificação melhoraram a detecção por PCR de Eimeria spp. em amostras de ovinos, amplificação positiva de DNA em todas as amostras testadas.

ABSTRACT: Molecular detection of Eimeria species in fecal samples can be useful for experimental and diagnostic purposes. However, the parasite quantity presence in feces and the oocyst wall are an obstacle in DNA extraction protocols. Therefore, adequate sampling and effective disruption of the oocysts are essential to improve the accuracy of DNA detection by PCR. The aims of this study were to evaluate the suitability of six protocols for DNA extraction from Eimeria spp. present in bovine and sheep. Twenty pools of fecal samples from cattle (10 pools) and sheep (10 pools) were distributed to six DNA extraction protocols: commercial kit, commercial kit with modification, DNAzol, cetyl-trimethyl ammonium bromide (CTAB), glass beads and commercial kit for fecal samples. Fecal samples were submitted to DNA extraction and PCR. Among the protocols tested, CTAB was determined to be most suitable for DNA extraction from oocysts (90% of DNA detection by PCR); DNAzol and CTAB resulted in higher DNA detection from bovine samples (80%). CTAB and commercial kit with modification improved PCR detection of Eimeria spp. in sheep samples, with positive amplification of DNA in all tested samples.

Neosporose é uma doença infecciosa causada pelo parasito Neospora caninum. Nos caprinos, as informações sobre neosporose ainda são bastante limitadas, especialmente no Estado de Santa Catarina (SC), Sul do Brasil. Em virtude disso, este estudo teve como objetivo avaliar a soroprevalência e os fatores de risco envolvidos na infecção por N. caninum em caprinos das regiões Oeste e Planalto Serrano do Estado de SC. Amostras de sangue foram coletadas de 654 caprinos em 57 cidades. A técnica de imunofluorescência indireta (RIFI) foi usada para a detecção sorológica de anticorpos contra N. caninum. Trinta amostras (4,58%) foram soropositivas para o agente infeccioso com títulos variando entre 1:50 a 1:6400. Durante a coleta de sangue, um levantamento epidemiológico foi realizado para identificar fatores de risco para neosporose em caprinos. Problemas reprodutivos presentes nas fazendas, bem como a dieta e o contato direto com cães foram detectados como fatores de risco para a doença. Os resultados indicam que N. caninum infecta cabras nas regiões avaliadas, o que pode estar relacionado a problemas reprodutivos nesta espécie.

Neosporosis is an infectious disease caused by the parasite Neospora caninum. Knowledge regarding neosporosis in goats is still quite limited, especially in the state of Santa Catarina (SC), southern Brazil. Therefore, this study aimed to assess the seroprevalence and risk factors for N. caninum in goats in the western and mountain regions of SC. Blood samples were collected from 654 goats in 57 municipalities. The indirect immunofluorescence test was used for antibody detection against N. caninum. Thirty samples (4.58%) were seropositive, with titers ranging from 1:50 to 1:6400. An epidemiological survey was also conducted in order to identify risk factors for neosporosis in goats. It was found that reproductive problems on the farms, as well as the diet and direct contact with dogs were casual risks for neosporosis. These results indicate that N. caninum infects goats in these regions, which may lead to reproductive problems.